Σπίτι  /  Ξανάνιωμα  /  Επιλογές για αντιδράσεις επιταχυνόμενης συγκόλλησης. Παθητική αντίδραση αιμοσυγκόλλησης και οι παραλλαγές της

Επιλογές για αντιδράσεις επιταχυνόμενης συγκόλλησης. Παθητική αντίδραση αιμοσυγκόλλησης και οι παραλλαγές της

Ξανάνιωμα
11.09.2020

13.1. Αντιδράσεις αντιγόνου-αντισώματος και οι χρήσεις τους

Όταν εγχέεται ένα αντιγόνο, σχηματίζονται αντισώματα στο σώμα. Τα αντισώματα είναι συμπληρωματικά του αντιγόνου που προκάλεσε τη σύνθεσή τους και είναι σε θέση να συνδεθούν με αυτό. Η σύνδεση των αντιγόνων με τα αντισώματα αποτελείται από δύο φάσεις. Η πρώτη φάση είναι ειδική, στην οποία υπάρχει ταχεία σύνδεση του αντιγονικού προσδιοριστή στο ενεργό κέντρο του θραύσματος αντισωμάτων Fab. Πρέπει να σημειωθεί ότι η δέσμευση οφείλεται σε δυνάμεις van der Waals, υδρογόνο και υδρόφοβες αλληλεπιδράσεις. Η ισχύς του δεσμού καθορίζεται από τον βαθμό χωρικής αντιστοιχίας μεταξύ της ενεργού θέσης του αντισώματος και του επιτόπου του αντιγόνου. Μετά τη συγκεκριμένη φάση, ξεκινά μια πιο αργή - μη ειδική, η οποία εκδηλώνεται με ορατό φυσικό φαινόμενο (για παράδειγμα, σχηματισμός νιφάδων κατά τη συγκόλληση κ.λπ.).

Οι ανοσολογικές αντιδράσεις είναι αλληλεπιδράσεις μεταξύ αντισωμάτων και αντιγόνων και αυτές οι αντιδράσεις είναι ειδικές και εξαιρετικά ευαίσθητες. Χρησιμοποιούνται ευρέως στην ιατρική πρακτική. Με τη βοήθεια ανοσολογικών αντιδράσεων, μπορούν να επιλυθούν οι ακόλουθες εργασίες:

Προσδιορισμός άγνωστων αντισωμάτων από γνωστά αντιγόνα (antigenic diagnosticum). Ένα τέτοιο καθήκον είναι όταν είναι απαραίτητο να προσδιοριστούν τα αντισώματα στο παθογόνο στον ορό αίματος του ασθενούς (οροδιάγνωση). Η εύρεση αντισωμάτων σάς επιτρέπει να επιβεβαιώσετε τη διάγνωση.

Προσδιορισμός άγνωστων αντιγόνων με γνωστά αντισώματα (διαγνωστικός ορός). Αυτή η μελέτη πραγματοποιείται κατά τον εντοπισμό της καλλιέργειας του παθογόνου που απομονώθηκε από το υλικό του ασθενούς (ορότυπος), καθώς και κατά την ανίχνευση

αντιγόνα μικροβίων και τις τοξίνες τους στο αίμα και άλλα βιολογικά υγρά. Υπάρχουν πολλοί τύποι ανοσολογικών αντιδράσεων που διαφέρουν ως προς την τεχνική ρύθμισης και το καταγεγραμμένο αποτέλεσμα. Αυτές είναι οι αντιδράσεις συγκόλλησης (RA), η κατακρήμνιση (RP), οι αντιδράσεις που περιλαμβάνουν συμπλήρωμα (RCC), οι αντιδράσεις που χρησιμοποιούν επισημασμένα συστατικά (RIF, ELISA, RIA).

13.2. Αντίδραση συγκόλλησης

Η αντίδραση συγκόλλησης (RA) είναι ανοσολογική απόκρισηαλληλεπιδράσεις του αντιγόνου με αντισώματα παρουσία ηλεκτρολυτών και το αντιγόνο βρίσκεται σε σωματιδιακή κατάσταση (ερυθροκύτταρα, βακτήρια, σωματίδια λατέξ με προσροφημένα αντιγόνα). Κατά τη συγκόλληση, τα σωματιδιακά αντιγόνα κολλώνται μεταξύ τους με αντισώματα, κάτι που εκδηλώνεται με το σχηματισμό κροκιδώδους ιζήματος. Ο σχηματισμός νιφάδων συμβαίνει λόγω του γεγονότος ότι τα αντισώματα έχουν δύο ενεργά κέντρα και τα αντιγόνα είναι πολυσθενή, δηλ. έχουν πολλαπλούς αντιγονικούς καθοριστικούς παράγοντες. Η ΡΑ χρησιμοποιείται για την αναγνώριση του παθογόνου που απομονώθηκε από το υλικό του ασθενούς, καθώς και για την ανίχνευση αντισωμάτων στο παθογόνο στον ορό του αίματος του ασθενούς (για παράδειγμα, οι αντιδράσεις Wright και Huddleson στη βρουκέλλωση, η αντίδραση Vidal στον τυφοειδή πυρετό και ο παρατυφοειδής πυρετός ).

Ο ευκολότερος τρόπος ρύθμισης της ΡΑ είναι μια αντίδραση σε γυαλί, αυτή είναι μια κατά προσέγγιση ΡΑ, η οποία χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του παθογόνου που απομονώθηκε από τον ασθενή. Κατά τη ρύθμιση της αντίδρασης σε γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα, εφαρμόζεται διαγνωστικός ορός συγκόλλησης (σε αραίωση 1:10 ή 1:20), στη συνέχεια εισάγεται καλλιέργεια από τον ασθενή. Η αντίδραση είναι θετική εάν εμφανιστεί κροκιδωτικό ίζημα στη σταγόνα. Κοντά τοποθετείται μάρτυρας: αντί για ορό, εφαρμόζεται μια σταγόνα διαλύματος χλωριούχου νατρίου. Εάν ο διαγνωστικός ορός συγκόλλησης είναι μη προσροφημένος 1, τότε αραιώνεται (στον τίτλο - την αραίωση στην οποία πρέπει να συμβεί συγκόλληση), π.χ. βάλτε τη διογκωμένη ΡΑ σε δοκιμαστικούς σωλήνες με αύξηση

1 Ο μη προσροφημένος συγκολλητικός ορός μπορεί να συγκολλήσει σχετικά βακτήρια που έχουν κοινά (διασταυρούμενα αντιδρώντα) αντιγόνα. Επομένως, απολαύστεπροσροφημένοι οροί συγκόλλησης, από τα οποία έχουν αφαιρεθεί διασταυρούμενα αντιδρώντα αντισώματα με προσρόφηση από τα σχετικά βακτήρια τους. Σε τέτοιους ορούς παραμένουν αντισώματα ειδικά μόνο για αυτό το βακτήριο.

αραιώσεις ορού συγκόλλησης, στον οποίο προστίθενται 2-3 σταγόνες από ένα εναιώρημα του παθογόνου που απομονώθηκε από τον ασθενή. Η συγκόλληση λαμβάνεται υπόψη από την ποσότητα του ιζήματος και τον βαθμό διαύγασης του υγρού στους δοκιμαστικούς σωλήνες. Η αντίδραση θεωρείται θετική εάν σημειωθεί συγκόλληση σε αραίωση κοντά στον τίτλο του διαγνωστικού ορού. Η αντίδραση συνοδεύεται από μάρτυρες: ο ορός, αραιωμένος με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, πρέπει να είναι διαφανής, το εναιώρημα μικροβίων στο ίδιο διάλυμα πρέπει να είναι ομοιόμορφα θολό, χωρίς ίζημα.

Για τον προσδιορισμό των αντισωμάτων στο παθογόνο στον ορό του αίματος του ασθενούς, χρησιμοποιείται μια διογκωμένη ΡΑ. Όταν τοποθετείται σε δοκιμαστικούς σωλήνες, ο ορός αίματος του ασθενούς αραιώνεται και ίση ποσότητα διαγνωστικού εναιωρήματος (εναιώρημα νεκρών μικροβίων) προστίθεται στους δοκιμαστικούς σωλήνες. Μετά την επώαση, προσδιορίζεται η υψηλότερη αραίωση ορού στην οποία συνέβη η συγκόλληση, δηλ. σχηματίστηκε ένα ίζημα (τίτλος ορού). Σε αυτή την περίπτωση, η αντίδραση συγκόλλησης με το O-diagnosticum (βακτήρια που σκοτώνονται με θέρμανση, διατηρώντας ένα θερμοσταθερό Ο-αντιγόνο) λαμβάνει χώρα με τη μορφή λεπτόκοκκης συγκόλλησης. Η αντίδραση συγκόλλησης με το H-diagnosticum (βακτήρια που σκοτώνονται από φορμαλίνη, που διατηρούν το ασταθές στη θερμότητα αντιγόνο Η-μαστιγίου) είναι χονδρόκοκκη και προχωρά πιο γρήγορα.

Η αντίδραση της έμμεσης (παθητικής) αιμοσυγκόλλησης(RNGA ή RPGA) είναι ένας τύπος ΡΑ. Αυτή η μέθοδος είναι ιδιαίτερα ευαίσθητη. Με τη βοήθεια του RNGA, δύο εργασίες μπορούν να επιλυθούν: να προσδιοριστούν τα αντισώματα στον ορό αίματος του ασθενούς, στον οποίο προστίθεται ένα αντιγονικό ερυθροκύτταρο diagnosticum, το οποίο είναι ερυθροκύτταρα στα οποία προσροφούνται γνωστά αντιγόνα. προσδιορισμό της παρουσίας αντιγόνων στο υλικό δοκιμής. Σε αυτή την περίπτωση, η αντίδραση ονομάζεται μερικές φορές αντίστροφη έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (RONGA). Κατά τη σταδιοποίηση, ένα αντίσωμα ερυθροκύτταρο diagnosticum (ερυθροκύτταρα με αντισώματα προσροφημένα στην επιφάνειά τους) προστίθεται στο υλικό δοκιμής. Τα ερυθροκύτταρα σε αυτή την αντίδραση δρουν ως φορείς και εμπλέκονται παθητικά στο σχηματισμό ανοσοσυσσωματωμάτων. Με μια θετική αντίδραση, τα παθητικά κολλημένα ερυθροκύτταρα καλύπτουν τον πυθμένα του φρέατος με ένα ομοιόμορφο στρώμα με χτενισμένες άκρες ("ομπρέλα"). ελλείψει συγκόλλησης, τα ερυθροκύτταρα συσσωρεύονται στην κεντρική εσοχή της οπής, σχηματίζοντας ένα συμπαγές "κουμπί" με έντονα καθορισμένες άκρες.

Αντίδραση πήξηςχρησιμοποιείται για την ανίχνευση παθογόνων κυττάρων (αντιγόνων) χρησιμοποιώντας αντισώματα που έχουν προσροφηθεί Η ασθένεια του σταφυλοκοκου,που περιέχει πρωτεΐνη Α. Η πρωτεΐνη Α έχει συγγένεια με το θραύσμα Fc των ανοσοσφαιρινών. Εξαιτίας αυτού, τα αντισώματα συνδέονται με τον σταφυλόκοκκο έμμεσα μέσω του θραύσματος Fc και τα θραύσματα Fab προσανατολίζονται προς τα έξω και είναι σε θέση να αλληλεπιδρούν με τα αντίστοιχα μικρόβια που απομονώνονται από ασθενείς. Σε αυτή την περίπτωση, σχηματίζονται νιφάδες.

Αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης (HITA)χρησιμοποιείται στη διάγνωση ιογενείς λοιμώξεις, και μόνο λοιμώξεις που προκαλούνται από ιούς αιμοσυγκόλλησης. Αυτοί οι ιοί περιέχουν στην επιφάνειά τους μια πρωτεΐνη - αιμοσυγκολλητίνη, η οποία είναι υπεύθυνη για την αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (RHA) όταν προστίθεται στους ιούς των ερυθροκυττάρων. Το RTGA συνίσταται στον αποκλεισμό των ιικών αντιγόνων με αντισώματα, με αποτέλεσμα οι ιοί να χάνουν την ικανότητά τους να συγκολλούν τα ερυθρά αιμοσφαίρια.

Αντίδραση Coombs -ΡΑ για ανίχνευση ατελών αντισωμάτων. Σε ορισμένες μολυσματικές ασθένειες, όπως η βρουκέλλωση, στον ορό του αίματος του ασθενούς κυκλοφορούν ελλιπή αντισώματα έναντι του παθογόνου. Τα ατελή αντισώματα ονομάζονται αποκλειστικά επειδή έχουν μία θέση δέσμευσης αντιγόνου και όχι δύο, όπως τα πλήρη αντισώματα. Επομένως, όταν προστίθεται ένα αντιγονικό διαγνωστικό, ελλιπή αντισώματα συνδέονται με αντιγόνα, αλλά δεν τα κολλούν μεταξύ τους. Για να εκδηλωθεί η αντίδραση, προστίθεται ορός αντισφαιρίνης (αντισώματα σε ανθρώπινες ανοσοσφαιρίνες), ο οποίος θα οδηγήσει σε συγκόλληση ανοσοσυμπλεγμάτων (αντιγονικό diagnosticum + ελλιπή αντισώματα) που σχηματίζονται στο πρώτο στάδιο της αντίδρασης.

Η έμμεση αντίδραση Coombs χρησιμοποιείται σε ασθενείς με ενδαγγειακή αιμόλυση. Σε ορισμένους από αυτούς τους ασθενείς, ανευρίσκονται ελλιπή μονοσθενή αντισώματα κατά του Rhesus. Αλληλεπιδρούν συγκεκριμένα με τα θετικά Rh ερυθροκύτταρα, αλλά δεν προκαλούν τη συγκόλληση τους. Επομένως, ορός αντισφαιρίνης προστίθεται στο σύστημα αντισωμάτων αντι-Rh + θετικών ερυθροκυττάρων, γεγονός που προκαλεί συγκόλληση των ερυθροκυττάρων. Χρησιμοποιώντας την αντίδραση Coombs, διαγιγνώσκονται παθολογικές καταστάσεις που σχετίζονται με ενδαγγειακή λύση ερυθροκυττάρων ανοσιακής προέλευσης, για παράδειγμα, αιμολυτική νόσος του νεογνού λόγω σύγκρουσης Rhesus.

ΡΑ για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματοςβασίζεται στη συγκόλληση των ερυθροκυττάρων από αντισώματα του ανοσοποιητικού ορού σε αντιγόνα των ομάδων αίματος Α (II), Β (III). Ο έλεγχος είναι ορός που δεν περιέχει αντισώματα, δηλ. ομάδες αίματος ΑΒ (IV) ορού και αντιγόνα ερυθροκυττάρων των ομάδων Α (Ρ) και Β (ΙΙΙ). Τα ερυθροκύτταρα της ομάδας 0(Ι) χρησιμοποιούνται ως αρνητικός έλεγχος επειδή δεν έχουν αντιγόνα.

Για τον προσδιορισμό του παράγοντα Rh, χρησιμοποιούνται οροί anti-Rh (τουλάχιστον δύο διαφορετικές σειρές). Παρουσία του αντιγόνου Rh στη μεμβράνη των ερυθροκυττάρων που μελετήθηκαν, συμβαίνει συγκόλληση αυτών των κυττάρων.

13.3. αντίδραση καθίζησης

Το RP είναι μια ανοσολογική αντίδραση της αλληλεπίδρασης αντισωμάτων με αντιγόνα παρουσία ηλεκτρολυτών και το αντιγόνο είναι σε διαλυτή κατάσταση. Κατά την καθίζηση, τα διαλυτά αντιγόνα κατακρημνίζονται από αντισώματα, η οποία εκδηλώνεται με θολότητα με τη μορφή ζωνών καθίζησης. Ο σχηματισμός ενός ορατού ιζήματος παρατηρείται όταν και τα δύο αντιδραστήρια αναμειγνύονται σε ισοδύναμες αναλογίες. Η περίσσεια ενός από αυτά μειώνει την ποσότητα των κατακρημνισμένων ανοσοσυμπλεγμάτων. Υπάρχουν διάφοροι τρόποι για να ρυθμίσετε μια αντίδραση καθίζησης.

Αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίουτοποθετούνται σε σωλήνες καθίζησης μικρής διαμέτρου. Ο ανοσολογικός ορός προστίθεται στον δοκιμαστικό σωλήνα και το διαλυτό αντιγόνο επιστρώνεται προσεκτικά. Με θετικό αποτέλεσμα, σχηματίζεται ένας γαλακτώδης δακτύλιος στο όριο των δύο διαλυμάτων. Η αντίδραση καταβύθισης δακτυλίου, η οποία καθορίζει την παρουσία αντιγόνων σε όργανα και ιστούς, τα εκχυλίσματα των οποίων βράζονται και φιλτράρονται, ονομάζεται αντίδραση θερμοκαθίζησης (αντίδραση Ascoli για τον προσδιορισμό ενός θερμοσταθερού αντιγόνου άνθρακα).

Αντίδραση διπλής ανοσοδιάχυσης Ouchterlony.Αυτή η αντίδραση διεξάγεται σε γέλη άγαρ. Τα φρεάτια κόβονται σε ένα στρώμα γέλης ομοιόμορφου πάχους σε μια ορισμένη απόσταση το ένα από το άλλο και γεμίζονται με αντιγόνο και ανοσοποιητικό ορό, αντίστοιχα. Μετά από αυτό, τα αντιγόνα και τα αντισώματα διαχέονται στο πήκτωμα, συναντώνται μεταξύ τους και σχηματίζουν ανοσοσυμπλέγματα, τα οποία καθιζάνουν στο πήκτωμα και γίνονται ορατά ως γραμμές καθίζησης.

θρέψη. Αυτή η αντίδραση μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση άγνωστων αντιγόνων ή αντισωμάτων, καθώς και για τον έλεγχο της ομοιότητας μεταξύ διαφορετικών αντιγόνων: εάν τα αντιγόνα είναι πανομοιότυπα, οι γραμμές καθίζησης συγχωνεύονται· εάν τα αντιγόνα δεν είναι πανομοιότυπα, οι γραμμές καθίζησης τέμνονται· εάν τα αντιγόνα είναι εν μέρει πανομοιότυπο, σχηματίζεται ένα σπιρούνι.

Αντίδραση ακτινικής ανοσοδιάχυσης.Αντισώματα προστίθενται στο λιωμένο πήκτωμα άγαρ και το πήκτωμα εφαρμόζεται σε ομοιόμορφο στρώμα στην αντικειμενοφόρο πλάκα. Τα φρεάτια κόβονται στο πήκτωμα και ένας τυπικός όγκος διαλυμάτων αντιγόνου διαφόρων συγκεντρώσεων εισάγεται σε αυτά. Κατά τη διάρκεια της επώασης, τα αντιγόνα διαχέονται ακτινικά έξω από το φρεάτιο και, όταν συναντούν αντισώματα, σχηματίζουν έναν δακτύλιο καθίζησης. Εφόσον υπάρχει περίσσεια αντιγόνου στο φρεάτιο, υπάρχει σταδιακή αύξηση της διαμέτρου του δακτυλίου καθίζησης. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό αντιγόνων ή αντισωμάτων στο δοκιμαστικό διάλυμα (για παράδειγμα, για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης ανοσοσφαιρινών διαφορετικών τάξεων στον ορό του αίματος).

Ανοσοηλεκτροφόρηση.Το μίγμα των αντιγόνων διαχωρίζεται προκαταρκτικά με ηλεκτροφόρηση, και στη συνέχεια ο αντιορός καθίζησης εισάγεται στην αυλάκωση που τρέχει κατά μήκος της κατεύθυνσης της κίνησης της πρωτεΐνης. Τα αντιγόνα και τα αντισώματα διαχέονται στο πήκτωμα το ένα προς το άλλο. αλληλεπιδρώντας, σχηματίζουν τοξοειδείς γραμμές βροχόπτωσης.

αντίδραση κροκίδωσης(σύμφωνα με τον Ramon) - ένα είδος αντίδρασης καθίζησης, το οποίο χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της δραστηριότητας του αντιτοξικού ορού ή του τοξοειδούς. Η αντίδραση διεξάγεται σε δοκιμαστικούς σωλήνες. Σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα όπου το τοξοειδές και η αντιτοξίνη βρίσκονται σε ισοδύναμη αναλογία, παρατηρείται θολότητα.

13.4. Αντίδραση στερέωσης συμπληρώματος

Τα αντισώματα, αλληλεπιδρώντας με το αντίστοιχο αντιγόνο, δεσμεύουν το προστιθέμενο συμπλήρωμα (1ο σύστημα). Ο δείκτης στερέωσης του συμπληρώματος είναι τα ερυθροκύτταρα που ευαισθητοποιούνται από τον αιμολυτικό ορό, δηλ. αντισώματα στα ερυθροκύτταρα (2ο σύστημα). Εάν το συμπλήρωμα δεν είναι σταθερό στο 1ο σύστημα, π.χ. η αντίδραση αντιγόνου-αντισώματος δεν συμβαίνει, τότε τα ευαισθητοποιημένα ερυθρά αιμοσφαίρια λύονται πλήρως (αρνητική αντίδραση). Όταν το συμπλήρωμα δεσμεύεται από ανοσοσυμπλέγματα του 1ου συστήματος, μετά την προσθήκη ευαισθητοποιημένων ερυθροκυττάρων, αιμόλυση

απουσιάζει (θετική αντίδραση). Η αντίδραση στερέωσης συμπληρώματος χρησιμοποιείται για τη διάγνωση μολυσματικών ασθενειών (γονόρροια, σύφιλη, γρίπη κ.λπ.).

13.5. Αντίδραση εξουδετέρωσης

Τα μικρόβια και οι τοξίνες τους έχουν καταστροφική επίδραση στα όργανα και τους ιστούς του ανθρώπινου σώματος. Τα αντισώματα είναι ικανά να δεσμεύονται σε αυτούς τους επιβλαβείς παράγοντες και να τους εμποδίζουν, δηλ. εξουδετερώνω. Η διαγνωστική αντίδραση εξουδετέρωσης βασίζεται σε αυτό το χαρακτηριστικό των αντισωμάτων. Πραγματοποιείται με την εισαγωγή ενός μείγματος αντιγόνου-αντισώματος σε ζώα ή σε ευαίσθητα αντικείμενα δοκιμής (κυτταροκαλλιέργεια, έμβρυα). Για παράδειγμα, για την ανίχνευση τοξινών στο υλικό του ασθενούς, τα ζώα της 1ης ομάδας εγχέονται με το υλικό του ασθενούς. Στα ζώα της 2ης ομάδας ενίεται παρόμοιο υλικό, προκατεργασμένο με τον κατάλληλο αντιορό. Τα ζώα της 1ης ομάδας πεθαίνουν παρουσία τοξίνης στο υλικό. Η δεύτερη ομάδα ζώων επιβιώνει, η καταστροφική επίδραση της τοξίνης δεν εκδηλώνεται, αφού εξουδετερώνεται.

13.6. Αντιδράσεις που χρησιμοποιούν επισημασμένα αντισώματα ή αντιγόνα

13.6.1. Αντίδραση ανοσοφθορισμού (RIF, μέθοδος Koons)

Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται για ταχεία διάγνωση. Μπορεί να ανιχνεύσει τόσο μικροβιακά αντιγόνα όσο και αντισώματα.

Μέθοδος Direct RIF- μια ανοσολογική αντίδραση της αλληλεπίδρασης αντισωμάτων με αντιγόνα, και τα αντισώματα επισημαίνονται με ένα φθορόχρωμο - μια ουσία ικανή να εκπέμπει κβάντα φωτός συγκεκριμένου μήκους κύματος όταν χτυπηθεί από φως συγκεκριμένου μήκους κύματος. Η ιδιαιτερότητα της ρύθμισης αυτής της μεθόδου είναι η ανάγκη αφαίρεσης συστατικών που δεν αντέδρασαν προκειμένου να αποκλειστεί η ανίχνευση μη ειδικής φωταύγειας. Για να το κάνετε αυτό, πραγματοποιήστε το ξέπλυμα αντισωμάτων που δεν αντέδρασαν. Τα αποτελέσματα αξιολογούνται με τη χρήση μικροσκοπίου φθορισμού. Τα βακτήρια σε ένα επίχρισμα που έχει υποστεί επεξεργασία με έναν τέτοιο φωταυγή ορό λάμπουν σε σκούρο φόντο κατά μήκος της περιφέρειας του κυττάρου.

Έμμεση μέθοδος RIFχρησιμοποιήθηκε περισσότερο από το προηγούμενο. Αυτή η αντίδραση πραγματοποιείται σε δύο στάδια. Στο πρώτο στάδιο, τα αντιγόνα αμοιβαία

αλληλεπιδρούν με τα αντίστοιχα αντισώματα, σχηματίζοντας ανοσοσυμπλέγματα. Όλα τα συστατικά που δεν έχουν αντιδράσει (δηλαδή δεν αποτελούν μέρος των ανοσοσυμπλεγμάτων) πρέπει να αφαιρούνται με πλύσιμο. Στο δεύτερο στάδιο, το σχηματιζόμενο σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος ανιχνεύεται χρησιμοποιώντας ορό φθοριοχρωμικής αντισφαιρίνης. Ως αποτέλεσμα, σχηματίζεται ένα σύνθετο μικρόβιο + αντιμικροβιακά αντισώματα κουνελιού + αντισώματα σε ανοσοσφαιρίνες κουνελιού που έχουν επισημανθεί με φθορόχρωμα. Τα αποτελέσματα αξιολογούνται με τη χρήση μικροσκοπίου φθορισμού.

13.6.2. Ανοσοδοκιμασία ή δοκιμασία

Η ELISA είναι η πιο κοινή σύγχρονη μέθοδοςχρησιμοποιείται για τη διάγνωση ιογενών, βακτηριακών, πρωτόζωων λοιμώξεων, ιδίως για τη διάγνωση της λοίμωξης HIV, της ιογενούς ηπατίτιδας κ.λπ.

Υπάρχουν πολλές τροποποιήσεις ELISA. Η μη ανταγωνιστική ELISA στερεάς φάσης χρησιμοποιείται ευρέως. Εκτελείται σε πλάκες πολυστερίνης 96 φρεατίων (στερεά φάση). Κατά τη διάρκεια της αντίδρασης, είναι απαραίτητο να ξεπλυθούν τα συστατικά που δεν αντέδρασαν σε κάθε στάδιο. Κατά τον προσδιορισμό των αντισωμάτων, τα φρεάτια στα οποία έχουν προσροφηθεί τα αντιγόνα γεμίζουν με τον ορό αίματος που μελετάται και μετά τον ορό αντισφαιρίνης που επισημαίνεται με το ένζυμο. Δείξτε την αντίδραση προσθέτοντας ένα υπόστρωμα για το ένζυμο. Παρουσία του ενζύμου, το υπόστρωμα αλλάζει και το σύμπλοκο ενζύμου-υποστρώματος επιλέγεται με τέτοιο τρόπο ώστε το προϊόν που σχηματίζεται στην αντίδραση να χρωματίζεται. Έτσι, με μια θετική αντίδραση, παρατηρείται αλλαγή στο χρώμα του διαλύματος. Για τον προσδιορισμό των αντιγόνων, ένας φορέας στερεάς φάσης ευαισθητοποιείται με αντισώματα και στη συνέχεια εισάγονται διαδοχικά το υλικό δοκιμής (αντιγόνα) και ο ορός αντιγόνου σημασμένο με ένζυμα. Για την εκδήλωση της αντίδρασης εισάγεται ένα υπόστρωμα για το ένζυμο. Μια αλλαγή στο χρώμα του διαλύματος συμβαίνει με μια θετική αντίδραση.

13.6.3. Ανοσοκηλίδωση

Αυτή η μέθοδος βασίζεται σε συνδυασμό ηλεκτροφόρησης και ELISA. Κατά τη διεξαγωγή ανοσοστύπωσης (blotting από τα αγγλικά. κηλίδα- spot) ένα σύνθετο μείγμα αντιγόνων υποβάλλεται πρώτα σε ηλεκτροφόρηση σε ένα πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου. Το προκύπτον κλασματοποιημένο αντι-

γονιδιακά πεπτίδια μεταφέρονται σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Τα στυπώματα στη συνέχεια υποβάλλονται σε επεξεργασία με σημασμένα με ένζυμα αντισώματα έναντι του ειδικού αντιγόνου, δηλ. διενεργήστε ένα στύπωμα ELISA. Το immunoblotting χρησιμοποιείται στη διάγνωση λοιμώξεων όπως ο HIV.

13.6.4. Ανοσολογική ηλεκτρονική μικροσκοπία

Η μέθοδος συνίσταται στη μικροσκόπηση σε ηλεκτρονικό μικροσκόπιο ιών (σπανίως άλλων μικροβίων), που έχουν προηγουμένως υποβληθεί σε επεξεργασία με κατάλληλο ανοσοορό σημασμένο με σκευάσματα πυκνά ηλεκτρονικά, για παράδειγμα, φερριτίνη, μια πρωτεΐνη που περιέχει σίδηρο.

13.7. κυτταρομετρία ροής

Τα κύτταρα του αίματος διαφοροποιούνται με βάση την κυτταροφθορομετρία με λέιζερ. Για να γίνει αυτό, τα επιθυμητά κύτταρα χρωματίζονται με φθορίζοντα μονοκλωνικά αντισώματα έναντι των αντιγόνων CD. Ένα δείγμα αίματος μετά από επεξεργασία με επισημασμένα αντισώματα διέρχεται μέσω ενός λεπτού σωλήνα και μια δέσμη λέιζερ διέρχεται μέσω αυτού, η οποία διεγείρει τη φωταύγεια του φθοριούχου χρωμίου. Η ένταση του φθορισμού συσχετίζεται με την πυκνότητα των αντιγόνων στην κυτταρική επιφάνεια και μπορεί να ποσοτικοποιηθεί χρησιμοποιώντας φωτοπολλαπλασιαστή. Τα αποτελέσματα που λαμβάνονται μετατρέπονται σε ιστόγραμμα.

Η κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της ανοσολογικής κατάστασης (το περιεχόμενο των κύριων πληθυσμών λεμφοκυττάρων, το περιεχόμενο των ενδοκυτταρικών και εξωκυτταρικών κυτοκινών, η λειτουργική δραστηριότητα των κυττάρων ΝΚ, η δραστηριότητα της φαγοκυττάρωσης κ.λπ.).

Διάλεξη Νο 16

Γλωσσάριο

ΑΜΕΣΑ -αμέσως επόμενο χωρίς τίποτα, χωρίς να ακολουθήσετε συνδέσμους.

ΕΜΜΕΣΑ– μέσω άλλων κυττάρων, όχι απευθείας.

ΜΕΙΩΣΗ ≠ ΑΥΞΗΣΗ (δραστηριότητα κυττάρων).

ΑΠΟΡΡΙΨΗ -δεν αποδέχομαι, απορρίπτω. Το σώμα απέρριψε το μεταμοσχευμένο όργανο.

ανοσολογικές αντιδράσεις.

Οι αντιδράσεις ανοσίας είναι αντιδράσεις ειδικής αλληλεπίδρασης (δέσμευσης) ενός αντιγόνου και ενός αντισώματος ή ενός αντιγόνου και ενός ευαισθητοποιημένου Τ-λεμφοκυττάρου.

Αυτές οι αντιδράσεις λαμβάνουν χώρα in vitro (σε δοκιμαστικό σωλήνα) και in vivo (σε ζωντανό οργανισμό).

Ο ορός εμπλέκεται σε αυτές τις αντιδράσεις, γι' αυτό ονομάζονται ορρολογικός.

χρησιμοποιούνται ανοσοποιητικές αντιδράσεις διάγνωση μολυσματικών ασθενειών.Σε αυτή την περίπτωση, το άγνωστο συστατικό προσδιορίζεται από το γνωστό συστατικό, το οποίο βασίζεται στην ειδικότητα της αλληλεπίδρασης του αντιγόνου με το αντίσωμα. Αν ένα γνωστό αντίσωμα, τότε μπορείς αναγνωρίζουν (εντοπίζουν) ένα άγνωστο αντιγόνο. Αν γνωστό αντιγόνο, τότε είναι δυνατό ανιχνεύουν άγνωστα αντισώματα.

Έτσι, χρησιμοποιούνται αντιδράσεις ανοσίας:

1) για ορολογική διάγνωση (οροδιάγνωση) ασθενειών -ανίχνευση αντισωμάτων σε συγκεκριμένο παθογόνο στον ορό αίματος ασθενών μολυσματική ασθένεια(γνωστό αντιγόνο); εάν υπάρχουν αντισώματα έναντι οποιουδήποτε παθογόνου στον ορό αίματος ενός άρρωστου ατόμου, τότε είναι αυτό το παθογόνο που προκάλεσε αυτή τη μολυσματική ασθένεια.

2) για ορολογική ταυτοποίηση (ορολογική ταυτοποίηση) μικροβίων -για τον προσδιορισμό του τύπου του αιτιολογικού παράγοντα της νόσου χρησιμοποιώντας ανοσοδιαγνωστικούς ορούς (γνωστά αντισώματα). εάν τα αντισώματα δεσμεύουν ένα παθογόνο που έχει απομονωθεί από ένα άρρωστο άτομο, τότε αυτό το μικρόβιο είναι πανομοιότυπο με αυτό με το οποίο ανοσοποιήθηκε το ζώο λήψηανοσοδιαγνωστικός ορός .

Οι αντιδράσεις ανοσίας προχωρούν σε 2 φάσεις:

1) συγκεκριμένη φάση- σύνδεση του ενεργού κέντρου του αντισώματος με την καθοριστική ομάδα του αντιγόνου με το σχηματισμό συμπλεγμάτων αντιγόνου-αντισώματος. αυτή η φάση προχωρά γρήγορα, αλλά δεν υπάρχει ορατό αποτέλεσμα.

2) μη ειδική φάση- εμφάνιση ορατό αποτέλεσμααλληλεπιδράσεις αντιγόνου-αντισώματος προσχέδιο(συγκόλληση) ή θολότητα(κατακρήμνιση), που επιτρέπει βλέπωεκπαίδευση σύμπλοκα αντιγόνου-αντισώματοςκαι βγάλτε συμπέρασμα για συμφωνίααντιγόνο και αντίσωμα μεταξύ τους.

Οι ανοσολογικές αποκρίσεις είναι αντίδραση συγκόλλησης (RA), αντίδραση καθίζησης (RP), αντίδραση στερέωσης συμπληρώματος (RCC).

Αντίδραση συγκόλλησης- αυτή είναι η προσκόλληση και η καθίζηση μικροβιακών ή άλλων κυττάρων (ερυθροκυττάρων) υπό τη δράση αντισωμάτων παρουσία ηλεκτρολύτη. Το ορατό αποτέλεσμα της αντίδρασης (φαινόμενο συγκόλλησης) είναι ο σχηματισμός ενός ιζήματος, το οποίο ονομάζεται συγκεκολλημένος.


Αυτή η αντίδραση χρησιμοποιείται για οροδιάγνωσηκαι οροαναγνώριση. Η ΡΑ χρησιμοποιείται για την οροδιάγνωση (ανίχνευση αντισωμάτων στον ορό αίματος ασθενών) τύφος και παρατύφος(αντίδραση Vidal), βρουκέλλωση(αντίδραση Ράιτ), τουλαραιμία και λεπτοσπείρωση. Η ΡΑ χρησιμοποιείται για την οροαναγνώριση (καθορισμός του τύπου του παθογόνου που απομονώνεται από τον ασθενή) όταν εντερικές λοιμώξεις, κοκκύτης, χολέρακαι τα λοιπά.

Συστατικάαντιδράσεις:

1. Α αντιγόνο (συγκολλητογόνο) -αυτά είναι ολόκληρα (όχι κατεστραμμένα) μικροβιακά ή άλλα κύτταρα ( αιμοσφαιρικός, αδιάλυτο αντιγόνο). Συγκολλητογόνα- είναι αναστολή ζωντανόςή σκοτώθηκεμικροβιακά κύτταρα ή οποιαδήποτε άλλα κύτταρα. Τα αντιγόνα μπορεί να είναι είτε άγνωστα είτε γνωστά. Ένα άγνωστο συγκολλητογόνο είναι μια μικροβιακή καλλιέργεια που απομονώνεται από το σώμα του ασθενούς και πρέπει να προσδιοριστεί. γνωστό αντιγόνο. diagnosticum- διαγνωστικό φάρμακο - αναστολή των νεκρώνμικρόβια γνωστά είδησε φυσιολογικό διάλυμα. Αυτή η αναστολή θολό (αδιαφανές)), επειδή τα μικροβιακά κύτταρα δεν διαλύονται, αλλά παραμένουν ανέπαφα. Ένα γνωστό συγκολλητογόνο θα χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση άγνωστων αντισωμάτων στον ορό του ασθενούς.

2. Αντίσωμα (συγκολλητίνη)- βρίσκεται στον ορό του αίματος. Τα αντισώματα μπορεί επίσης να είναι είτε άγνωστα είτε γνωστά. Στον ορό του αίματος βρίσκονται άγνωστα αντισώματα που πρέπει να προσδιοριστούν άρρωστος άνθρωπος. Γνωστά αντισώματα βρίσκονται σε ανοσοδιαγνωστικοί οροί, που ονομάζονται συγκολλητικός ορός. Χρησιμοποιούνται για οροαναγνώριση, δηλ. να προσδιοριστεί ένα άγνωστο αντιγόνο - ένας τύπος μικροβιακής καλλιέργειας.

3. Ηλεκτρολύτης- Διάλυμα χλωριούχου νατρίου 0,9%.

Κάντε ένα διαγνωστικό.

Μια καθαρή καλλιέργεια ενός παθογόνου ενός γνωστού είδους (για παράδειγμα, ο αιτιολογικός παράγοντας του τυφοειδή πυρετού) που αναπτύσσεται σε κεκλιμένο άγαρ ξεπλένεται με 3-4 ml ισοτονικού διαλύματος, τοποθετείται σε έναν αποστειρωμένο δοκιμαστικό σωλήνα, τα μικρόβια σκοτώνονται με κάποιο τρόπο (για παράδειγμα, με βρασμό και προσδιορίζεται η πυκνότητα (θα πρέπει να είναι 3 δισεκατομμύρια μικροβιακά κύτταρα σε 1 ml). Εάν τα μικροβιακά κύτταρα σκοτώνουν υψηλή θερμοκρασία, τότε παίρνουν O-diagnosticum (Ο-αντιγόνο), αλλά αν αντιμετωπιστεί με φορμαλίνη, τότε παίρνουν H-diagnosticum (Η-αντιγόνο).

Παραδείγματα διαγνωστικών: salmonella diagnosticum, brucellosis diagnosticum, tularemia diagnosticum.

Λήψη συγκολλητικών ορών.

Τα ζώα (συνήθως κουνέλια) 5-7 φορές κατά διαστήματα ενίονται παρεντερικά σε αυξανόμενες δόσεις μικροβιακών διαγνωστικών προβεί σε υπερανοσοποίηση), και στη συνέχεια λαμβάνεται ο ορός του αίματός τους, ο οποίος περιέχει αντισώματα σε εκείνα τα μικρόβια από τα οποία παρασκευάζεται το diagnosticum. Εάν η ανοσοποίηση γίνει με O-diagnosticum, τότε λαμβάνονται οροί Ο-συγκόλλησης (περιέχουν Ο-αντισώματα), εάν με H-diagnosticum - H-συγκολλητικός ορός.

Συγκολλητικός ορός μπορεί να είναι μη προσροφημένοή γηγενής και προσροφημένο.

Μη προσροφημένοι οροίπεριέχουν ομαδικά αντισώματα σε αρκετά στενά συγγενικά μικροβιακά είδη.

Προσροφημένος ορόςπεριέχουν αντισώματα σε ένα ή περισσότερα αντιγόνα ενός τύπου μικροβίου. Εάν οι οροί περιέχουν αντισώματα μόνο σε ένα αντιγόνο, ονομάζονται μονουποδοχέαςή μονοσθενήςεάν σε πολλά αντιγόνα - ομάδαπροσροφημένος ορός .

Παραδείγματα ορών συγκόλλησης:ορός συγκόλλησης Η με μονοϋποδοχέα σαλμονέλας, ορός συγκόλλησης Ο με προσροφημένη ομάδα σαλμονέλας, ορός συγκόλλησης Ο κατά της χολέρας κ.λπ..

Τίτλοςορός συγκόλλησης - η υψηλότερη αραίωση ορού, στην οποία ανιχνεύεται ακόμη η αντίδραση συγκόλλησης με το αντιγόνο (ο τίτλος εξαρτάται από την ποσότητα των αντισωμάτων στο αίμα: όσο περισσότερα αντισώματα, τόσο υψηλότερος είναι ο τίτλος του ορού).

Τρόποι ρύθμισης RA.

1. Κατά προσέγγιση (πλάκα) ΡΑ- πραγματοποιείται σε γυαλί. Εφαρμόστε 2 σταγόνες ορού και 1 σταγόνα ισοτονικού διαλύματος σε μια γυάλινη πλάκα. Μια μικροβιακή καλλιέργεια εισάγεται σε μια από τις σταγόνες του ορού και σε μια σταγόνα ισοτονικού διαλύματος με βρόχο και αναμειγνύεται. Σταγόνα ισοτονικού διαλύματος με μικρόβια – έλεγχος αντιγόνου, μία σταγόνα ορούς χωρίς μικρόβια – έλεγχος αντισωμάτων, μία σταγόνα ορός με μικρόβια – μια εμπειρία.Εάν ο ορός περιέχει αντισώματα που αντιστοιχούν σε μικροβιακά αντιγόνα που αναμειγνύονται με αυτόν, τότε τα αντισώματα και τα αντιγόνα θα συνδεθούν ειδικά μεταξύ τους και μετά από 1-3 λεπτά θα εμφανιστούν συγκολλημένες νιφάδες στην πειραματική σταγόνα. Ο έλεγχος αντιγόνου πρέπει να είναι θολός και ο έλεγχος αντισώματος πρέπει να είναι διαυγής. Ο υπολογισμός των αποτελεσμάτων της αντίδρασης πραγματοποιείται με την εμφάνιση νιφάδων συγκολλητικού . Εάν πέσουν νιφάδες, η αντίδραση είναι θετική, δηλ. ένα αντιγόνο αντιστοιχεί σε ένα αντίσωμα και ένα αντιγόνο μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ταυτοποίηση ενός αντισώματος ή αντίστροφα. Εάν η θολότητα παραμένει, η αντίδραση είναι αρνητική.

2. Εκτεταμένη αντίδραση συγκόλλησης -πραγματοποιούνται σε δοκιμαστικούς σωλήνες. Αρχικά, παρασκευάζονται διπλάσιες αραιώσεις του ορού αίματος ενός άρρωστου ατόμου από 1:50 έως 1:1600. 1 ml ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου χύνεται σε 6 δοκιμαστικούς σωλήνες. 1 ml ορού αίματος του ασθενούς σε αραίωση 1:50 προστίθεται στον πρώτο δοκιμαστικό σωλήνα, αναμειγνύεται και λαμβάνεται αραίωση 1:100, στη συνέχεια 1 ml αραίωσης 1:100 μεταφέρεται στον δεύτερο δοκιμαστικό σωλήνα. και προκύπτει αραίωση 1:200 κ.λπ. Δύο δοκιμαστικοί σωλήνες αφήνονται για τον έλεγχο του αντιγόνου και του ορού. Μόνο ορός αραιωμένος 1:50 προστίθεται στον ορό ελέγχου, μόνο το αντιγόνο προστίθεται στον έλεγχο αντιγόνου. 0,1 ml αντιγόνου - diagnosticum (Ο- ή Η-) προστίθεται σε όλους τους άλλους σωλήνες και όλοι οι σωλήνες τοποθετούνται σε θερμοστάτη στους 37°C για 18-20 ώρες. Η καταμέτρηση των αποτελεσμάτων της αντίδρασης πραγματοποιείται σύμφωνα με τη φύση, την ποσότητα του ιζήματος (συγκολλητίνης) που σχηματίζεται και τον βαθμό θολότητας. Η λογιστική διενεργείται μόνο με τα ακόλουθα αποτελέσματα στους ελέγχους: έλεγχος ορού - διαφανής, έλεγχος αντιγόνου - θολό. Τα Ο-αντισώματα δίνουν ένα λεπτόκοκκο ίζημα. H-αντισώματα - χονδρόκοκκα. Σύμφωνα με τον τελευταίο δοκιμαστικό σωλήνα, στον οποίο η αντίδραση συγκόλλησης είναι ακόμα ορατή, ρυθμίζεται διαγνωστικός τίτλος.

Με οροδιάγνωσηασθένειες, είναι σημαντικό όχι μόνο να ανιχνευθούν συγκεκριμένα αντισώματα σε ένα συγκεκριμένο παθογόνο, αλλά και να προσδιοριστεί ο αριθμός τους, δηλ. καθιερώστε έναν τέτοιο τίτλο αντισώματος, για ναΠότε μπορούμε να μιλήσουμε για την παρουσία μιας ασθένειας που προκαλείται από αυτό το παθογόνο . Αυτός ο τίτλος ονομάζεται διαγνωστικός τίτλος.Για παράδειγμα, για τη διάγνωση του τυφοειδούς πυρετού, είναι απαραίτητο να ανιχνευθεί τίτλος αντισωμάτων 1:400, αλλά όχι λιγότερο. Ακόμα πιο ακριβή αποτελέσματα ανίχνευση αύξησης αντισωμάτων σε ζευγαρωμένους ορούς.Ο ορός του ασθενούς λαμβάνεται κατά την έναρξη της νόσου και μετά από 3-5 ή περισσότερες ημέρες. Εάν ο τίτλος των αντισωμάτων αυξηθεί κατά τουλάχιστον 4 φορές, μπορούμε να μιλήσουμε τρέχουσα ασθένεια.

Εάν ρυθμιστεί μια λεπτομερής αντίδραση συγκόλλησης για οροαναγνώριση, τότε χρησιμοποιούνται διαγνωστικοί οροί συγκόλλησης, αραιωμένοι σε έναν τίτλο ή στο μισό του τίτλου τους. Η ΡΑ θεωρείται θετική εάν διαπιστωθεί συγκόλληση σε αραίωση κοντά στον διαγνωστικό τίτλο ορού.

Η αντίδραση συγκόλλησης (RA) είναι η προσκόλληση και η καθίζηση μικροβίων ή άλλων κυττάρων υπό τη δράση αντισωμάτων παρουσία ηλεκτρολύτη. Το ίζημα που προκύπτει ονομάζεται συγκολλητικό.

Η RA χρησιμοποιείται:

1. Για την ανίχνευση αντισωμάτων στον ορό του αίματος του ασθενούς (οροδιάγνωση).

2. Να προσδιοριστεί ο τύπος και ο ορός μιας καθαρής καλλιέργειας που απομονώθηκε από έναν ασθενή παθογόνους μικροοργανισμούς(ορότυπος).

Η αντίδραση συγκόλλησης χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό των αντισωμάτων στον ορό του αίματος ασθενών, για παράδειγμα, με τυφοειδή πυρετό και παρατυφοειδή πυρετό (αντίδραση Vidal), βρουκέλλωση (αντιδράσεις Wright, Huddleson), τουλαραιμία, λεπτοσπείρωση και άλλα. μεταδοτικές ασθένειες, καθώς και για τον προσδιορισμό του παθογόνου που απομονώθηκε από τον ασθενή (εντερικές λοιμώξεις, κοκκύτης κ.λπ.). Η ΡΑ χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος, του παράγοντα Rh κ.λπ.

Η αντίδραση απαιτεί τα ακόλουθα συστατικά:

1. Το αντιγόνο (συγκολλητογόνο) πρέπει να είναι σωματιδιακό, δηλαδή να είναι ένα εναιώρημα ζώντων ή νεκρών μικροοργανισμών (διάγνωση m), ερυθροκυττάρων ή άλλων κυττάρων. Συνήθως, χρησιμοποιείται καθημερινή καλλιέργεια μικροοργανισμών που αναπτύσσονται σε κλίση άγαρ. Η καλλιέργεια ξεπλένεται με 3-4 ml ισοτονικού διαλύματος, μεταφέρεται σε στείρο δοκιμαστικό σωλήνα και προσδιορίζεται η πυκνότητα. Το εναιώρημα πρέπει να είναι ομοιογενές και να περιέχει έως και 3 δισεκατομμύρια μικροβιακά κύτταρα ανά 1 ml. Η χρήση ενός εναιωρήματος σκοτωμένων μικροβίων - διαγνωστικών - διευκολύνει την εργασία (που παρασκευάζεται στο εργοστάσιο).

2. Αντισώματα (συγκολλητίνες) ανευρίσκονται στον ορό του ασθενούς (με οροδιάγνωση) ή σε ορό συγκόλλησης (με ορότυπο). Οι οροί συγκόλλησης λαμβάνονται με ανοσοποίηση κουνελιών με σκοτωμένα βακτήρια.

Συγκολλητικός τίτλοςορός ονομάζεται η υψηλότερη αραίωσή του, στην οποία δεν αντιδρά με το αντίστοιχο αντιγόνο υπό ορισμένες πειραματικές συνθήκες.

Οι οροί συγκόλλησης μπορεί να είναι φυσικοί (μη προσροφημένοι) και προσροφημένοι. Οι εγγενείς οροί σε μικρές αραιώσεις αλληλεπιδρούν όχι μόνο με τον τύπο των μικροοργανισμών με τους οποίους το ζώο ανοσοποιήθηκε για τη λήψη ορού, αλλά και με σχετικούς τύπους μικροοργανισμών, καθώς περιέχουν αντισώματα ομάδας (αντισώματα σε μικροοργανισμούς που έχουν κοινά αντιγόνα). Οι εγγενείς οροί χρησιμοποιούνται για μια εκτεταμένη αντίδραση συγκόλλησης (με οροδιάγνωση), η οποία λαμβάνει υπόψη όχι μόνο την παρουσία της αντίδρασης, αλλά και τη δυναμική της αύξησης του τίτλου αντισωμάτων.

Εάν τα ομαδικά αντισώματα εκχυλιστούν (προσροφηθούν) από φυσικό ορό μέσω αλληλεπίδρασης με σχετικά βακτήρια που έχουν αντιγόνα ομάδας, λαμβάνονται προσροφημένοι οροί. Οι προσροφημένοι οροί μπορεί να είναι μονοϋποδοχείς (ή ειδικοί για τον τύπο), που περιέχουν αντισώματα μόνο σε έναν υποδοχέα αντιγόνου.Οι πολυσθενείς οροί αποτελούνται από ένα μείγμα πολλών προσροφημένων ή μη ορών. Οι προσροφημένοι οροί χρησιμοποιούνται για την αντίδραση συγκόλλησης σε γυαλί.

Όταν τα ζώα ανοσοποιούνται με κινητά βακτήρια με Η-αντιγόνο, λαμβάνονται οροί Η-συγκόλλησης που περιέχουν Η-αντισώματα (για παράδειγμα, ορός συγκόλλησης Η μονοϋποδοχέα σαλμονέλας). Η ανοσοποίηση με Ο-αντιγόνο παράγει ορούς Ο-συγκόλλησης που περιέχουν Ο-αντισώματα (για παράδειγμα, ορός Ο-συγκόλλησης προσροφημένος από ομάδα σαλμονέλας, ορός Ο-συγκόλλησης κατά της χολέρας). Η ανοσοποίηση με Η- και Ο-αντιγόνα παράγει ορούς με Η- και Ο-αντισώματα.

Επιπλέον, οι Ο-συγκολλητίνες δίνουν ένα λεπτόκοκκο συγκολλητικό άλας και οι Η-συγκολλητίνες δίνουν ένα χονδρόκοκκο ίζημα.

3. Ηλεκτρολύτη - ισοτονικό διάλυμα NaCl (διάλυμα χλωριούχου νατρίου 0,9% παρασκευασμένο με απεσταγμένο νερό).

Υπάρχουν δύο κύριες μέθοδοι για τη δημιουργία μιας αντίδρασης συγκόλλησης: αντίδραση σε γυαλί (μερικές φορές ονομάζεται ενδεικτική ή ελασματική) και διογκωμένη αντίδραση (σε δοκιμαστικούς σωλήνες)

Δήλωση της αντίδρασης συγκόλλησης σε γυαλί. Δύο σταγόνες ορού και μια σταγόνα ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου εφαρμόζονται σε μια γυάλινη πλάκα χωρίς λίπος. Ο διαγνωστικός ορός συγκόλλησης λαμβάνεται σε μία αραίωση, η οποία, ανάλογα με τον τίτλο του, είναι 1:10, 1:25, 1:50 ή 1:100. Σε μία από τις σταγόνες ορού και μία σταγόνα ισοτονικού διαλύματος, εισάγεται καλλιέργεια του υπό μελέτη μικροοργανισμού με βρόχο και αναμιγνύεται επιμελώς. Μια σταγόνα χλωριούχου νατρίου με μικροοργανισμούς είναι έλεγχος αντιγόνου, μια σταγόνα ορού χωρίς μικροοργανισμούς είναι έλεγχος ορού. Μη μεταφέρετε την καλλιέργεια από την σταγόνα ορού στη σταγόνα NaCl. Η αντίδραση συνεχίζεται σε θερμοκρασία δωματίου για 1-3 λεπτά. Εάν ο έλεγχος ορού παραμένει διαυγής, παρατηρείται ομοιόμορφη θολότητα στον μάρτυρα αντιγόνου και εμφανίζονται συγκολλητικές νιφάδες στη σταγόνα όπου η καλλιέργεια αναμειγνύεται με ορό, τότε το αποτέλεσμα θεωρείται θετικό. Εάν υπάρχει ομοιόμορφη θολότητα σε μια σταγόνα με ορό και αντιγόνο, τότε αυτό είναι αρνητικό αποτέλεσμα. Η αντίδραση είναι πιο ευδιάκριτη σε σκούρο φόντο.

Ορρός

1. έλεγχος αντιγόνου

2. έλεγχος ορού

Η συγκόλληση αίματος είναι η συγκόλληση και η καθίζηση ερυθρών αιμοσφαιρίων, βακτηρίων και άλλων κυττάρων που μεταφέρουν αντιγόνα.

Η διαδικασία λαμβάνει χώρα υπό την επίδραση συγκολλητινών, οι οποίες είναι συγκεκριμένες ουσίες. Ο ρόλος αυτών των ουσιών είναι οι λεκτίνες ή τα αντισώματα.

Πιθανοί τύποι συγκόλλησης στον προσδιορισμό της ομάδας αίματος

Η συγκόλληση είναι ειδική και μη ειδική. Στην πρώτη περίπτωση, η αντίδραση λαμβάνει χώρα με τη συμμετοχή τριών συστατικών:

  • αντιγόνα;
  • αντισώματα?
  • ηλεκτρολύτες (χρησιμοποιείται ισοτονικό διάλυμα).

Όλα είναι μεταχειρισμένα πιθανούς τύπουςσυγκόλληση κατά τον προσδιορισμό της ομάδας αίματος, αλλά αυτή δεν είναι η μόνη περίπτωση.

Για ποιο σκοπό χρησιμοποιείται;

Το τεστ συγκόλλησης αίματος χρησιμοποιείται για τον εντοπισμό του αιτιολογικού παράγοντα μιας μολυσματικής νόσου. Ταυτόχρονα, κατακάθεται και είναι εύκολο να το ανιχνεύσουμε στο ίζημα. Αυτή η διαδικασία χρησιμοποιείται, όπως αναφέρθηκε παραπάνω, και αυτό είναι που θα συζητηθεί περαιτέρω.

Ποια είναι τα χαρακτηριστικά;

Τα ερυθρά αιμοσφαίρια περιέχουν αντιγόνα τύπου Α και Β. Προσδένονται στα αντισώματα α και β αντίστοιχα. Ομάδες αίματος και αντιδράσεις συγκόλλησης:

  • 1, 0 (ά, β) - δεν υπάρχουν αντιγόνα στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων.
  • 2, Α (β) - υπάρχουν αντιγόνο Α και αντίσωμα β.
  • 3, Β (ά) - περιέχει αντιγόνο Β και αντίσωμα ά.
  • 4, AB (00) - υπάρχουν δύο αντιγόνα, τα αντισώματα απουσιάζουν.

Αξίζει να σημειωθεί ότι τα αντιγόνα παρατηρούνται ήδη στο έμβρυο. Όσον αφορά τα αντισώματα, εμφανίζονται μετά τη γέννηση, τον πρώτο μήνα της ζωής.

Η συμβατότητα των ανθρώπων εξαρτάται από την ομάδα αίματος. Αυτός είναι ο λόγος για την απόρριψη του εμβρύου από το σώμα της μητέρας. Με άλλα λόγια, έχει αντισώματα στα αντιγόνα του αίματος του αγέννητου παιδιού. Σε αυτή την περίπτωση, εμφανίζεται ασυμβατότητα. Επιπλέον, κατά τη μετάγγιση πρέπει να λαμβάνεται υπόψη ο τύπος αίματος.

Εκπαίδευση

Οι ομάδες αίματος και οι αντιδράσεις συγκόλλησης είναι συμβατές έννοιες που χρησιμοποιούνται συχνά στην ιατρική.

Πριν από τη δοκιμή, είναι σημαντικό να ακολουθήσετε ορισμένες οδηγίες. Είναι απαραίτητο να αποκλειστεί προσωρινά η χρήση ορισμένων προϊόντων και φάρμακα. Αυτό θα βοηθήσει να γίνουν τα αποτελέσματα πιο ακριβή. Οι συστάσεις που πρέπει να ακολουθούνται συνταγογραφούνται από το γιατρό. Το γεγονός είναι ότι διαφορετικά εργαστήρια μπορεί να μην έχουν τα ίδια εύρη των τιμών που λαμβάνονται, δηλαδή διαφέρουν ελαφρώς.

Προϋποθέσεις για τη δοκιμή

Για να προσδιοριστεί με ακρίβεια η ομάδα αίματος, είναι σημαντικό να επιλέξετε τον σωστό εξοπλισμό. Αυτά περιλαμβάνουν:

  • και πιπέτα?
  • γυάλινες ράβδοι?
  • τυπικοί οροί ισοαιμοσυγκόλλησης.
  • ξηρές πήλινες πλάκες, οι οποίες χωρίζονται σε 4 τομείς.

Υπάρχουν απαιτήσεις για τις προϋποθέσεις της δοκιμής:

  • φως ημέρας;
  • η θερμοκρασία στο δωμάτιο είναι πάνω από +16 ˚С.
  • χρήση όγκων αίματος και ορού σε αναλογία 1:10.
  • Αξιόπιστα αποτελέσματα λαμβάνονται μέσα σε 5 λεπτά.

Παραπάνω είναι οι κύριες προϋποθέσεις και εργαλεία. Η συγκόλληση αίματος μπορεί να πραγματοποιηθεί με διάφορους τρόπους και καθένας από αυτούς προβάλλει μεμονωμένες απαιτήσεις.

Μέθοδοι

Πιθανές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της ομάδας αίματος με τη χρήση συγκόλλησης:

  • τυπική μέθοδος?
  • διασταυρούμενη αντίδραση?
  • χρήση τσολικλωνών?
  • μέθοδο express χρησιμοποιώντας το σετ "Erythrotest-Groupcard".

Τυπική μέθοδος

Η συγκόλληση αίματος εκδηλώνεται με τη χρήση των ερυθρών αιμοσφαιρίων του ασθενούς. Χρησιμοποιούνται επίσης τυπικοί οροί που περιέχουν γνωστά αντιγόνα.

Σε μια επίπεδη πλάκα, τοποθετείται 1 σταγόνα από τέσσερις ορούς. Στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας γυάλινες ράβδους, το αίμα του ασθενούς που θα εξεταστεί εισάγεται σε αυτό. Σε αυτή την περίπτωση, είναι βολικό να χρησιμοποιείτε σταγονόμετρο. Η αναλογία πρέπει να είναι 1:10. Ο ορός και το αίμα αναμιγνύονται απαλά. Μέσα σε πέντε λεπτά, μπορείτε να αξιολογήσετε.

Αποκρυπτογράφηση των αποτελεσμάτων των δοκιμών με απλό τρόπο

Μετά τον καθορισμένο χρόνο στις σταγόνες ορού, παρατηρείται φώτιση. Σε ορισμένες, μπορείτε να δείτε ότι έχει συμβεί συγκόλληση ερυθροκυττάρων (μικρές νιφάδες), σε άλλες απουσιάζει.

Υπάρχουν οι εξής επιλογές:

  • δεν υπάρχει αντίδραση σε όλα τα δείγματα ορού - ομάδα 1.
  • Η πήξη εμφανίστηκε παντού, εκτός από 2 δείγματα - ομάδα 2.
  • Καμία αντίδραση μόνο στο δείγμα 3 - ομάδα 3.
  • η συγκόλληση εμφανίστηκε παντού - ομάδα 4.

Έτσι, το κύριο πράγμα είναι να διανεμηθεί σωστά ο ορός. Τότε δεν θα είναι δύσκολο να αποκρυπτογραφήσετε το αποτέλεσμα. Εάν η συγκόλληση αίματος είναι αδύναμη, συνιστάται η επανεξέταση. Στην περίπτωση μικρών νιφάδων, εξετάζονται στο μικροσκόπιο.

διασταυρούμενη αντίδραση

Ωρες ωρες με απλό τρόποείναι αδύνατο να προσδιοριστεί με ακρίβεια η ομάδα αίματος. Η συγκόλληση σε αυτή την περίπτωση πραγματοποιείται με τη μέθοδο της διασταυρούμενης αντίδρασης. Σε αντίθεση με την πρώτη έκδοση του τεστ, τα τυπικά ερυθροκύτταρα είναι σημαντικά εδώ. Το αίμα του ασθενούς λαμβάνεται σε δοκιμαστικό σωλήνα, φυγοκεντρείται και στη συνέχεια ο ορός αντλείται με μια πιπέτα για περαιτέρω έρευνα.

Τοποθετείται σε ένα πιάτο σε ποσότητα 2 σταγόνων και στη συνέχεια προστίθενται σε αυτό πρότυπα ερυθρά αιμοσφαίρια των ομάδων Α και Β. Το περιεχόμενο αναδεύεται ανακινώντας το δοχείο.

Αποτελέσματα της μεθόδου διασταυρούμενης αντίδρασης

Μετά από πέντε λεπτά, τα δείγματα είναι έτοιμα για έλεγχο. Οι επιλογές είναι:

  • Η συγκόλληση έγινε και στις δύο σταγόνες - 1 ομάδα.
  • νιφάδες δεν παρατηρούνται σε κανένα από τα δείγματα - ομάδα 4.
  • η διαδικασία είναι ορατή σε ένα δείγμα - 2 ή 3 ομάδες (ανάλογα με το πού ακριβώς έχει πήξει το αίμα).

Μέθοδος Zolicone

Για τον προσδιορισμό της ομάδας αίματος, η συγκόλληση με αυτόν τον τρόπο πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας συνθετικά υποκατάστατα ορού. Τις λένε τσολικλόνες. Περιέχουν τεχνητά υποκατάστατα των α και β-συγκολλητινών γνωστά ως ερυθροδοκιμές (ροζ και μπλε, αντίστοιχα). Η αντίδραση εμφανίζεται μεταξύ αυτών και των ερυθρών αιμοσφαιρίων του ασθενούς.

Αυτή η μέθοδος είναι η πιο ακριβής και αξιόπιστη. Βασικά, δεν απαιτεί επανεξέταση. Η αξιολόγηση των αποτελεσμάτων πραγματοποιείται με τον ίδιο τρόπο όπως και στην περίπτωση της τυπικής μεθόδου. Η ιδιαιτερότητα είναι ότι πρέπει απαραίτητα να επιβεβαιωθεί με αντίδραση με συγκεκριμένο συνθετικό υποκατάστατο (αντι-ΑΒ). Επιπλέον, δεν παρατηρείται κόλλημα σε αυτό όταν προστίθεται διάλυμα χλωριούχου νατρίου.

Μέθοδος Express με ένα σύνολο "Erythrotest-Groupcards"

Θεωρώντας πιθανές μεθόδουςανάλυση κατά τον προσδιορισμό της ομάδας αίματος, αξίζει να σημειωθεί ότι αυτή η μέθοδος έχει τα δικά της χαρακτηριστικά. Βρίσκονται στο γεγονός ότι το αποτέλεσμα μπορεί να αξιολογηθεί όχι μόνο στο εργαστήριο, αλλά και στο πεδίο. Για τη μελέτη χρησιμοποιείται ειδικό σετ. Περιλαμβάνει μια κάρτα καλά με αποξηραμένα αντιδραστήρια που υπάρχουν ήδη στο κάτω μέρος. Εκτός από τα anti-AB, anti-A και anti-B, χρησιμοποιείται και το anti-D για τον προσδιορισμό του παράγοντα Rh.

Αυτή η μέθοδος δεν απαιτεί ειδική προετοιμασία, επιτρέπεται η χρήση αίματος που λαμβάνεται από ένα δάχτυλο, επιτρέπεται η παρουσία συντηρητικών σε αυτό. Πρώτα πρέπει να προσθέσετε μια σταγόνα νερό σε κάθε πηγάδι για να διαλυθούν τα συστατικά. Μετά από αυτό, προστίθεται αίμα, ανακατεύεται ελαφρά. Σε τρία λεπτά θα ληφθεί το αποτέλεσμα.

Ψευδής συγκόλληση

Μερικές φορές τα δεδομένα που λαμβάνονται μετά τη δοκιμή δεν είναι αληθή. Αυτό το φαινόμενο εξαρτάται από ορισμένους παράγοντες.

Υπάρχουν τρεις τύποι ψευδώς θετικών:

    Ψευδοσυγκόλληση. Η πραγματική σύνδεση δεν συμβαίνει, τα ερυθροκύτταρα απλώς διπλώνουν με τη μορφή στηλών νομισμάτων. Αν προσθέσετε μερικές σταγόνες φυσιολογικό ορό, καταρρέουν. Ένα παρόμοιο φαινόμενο αναγνωρίζεται στο μικροσκόπιο.

    Ψυχρή συγκόλληση αίματος. Μια τέτοια αντίδραση παρατηρείται εάν οι συνθήκες για τη μελέτη ήταν δυσμενείς. Όταν η θερμοκρασία είναι κάτω από +16 ˚C, μπορεί να συμβεί συγκόλληση.

    Πανσυγκόλληση. Εάν υπάρχει λοίμωξη στο αίμα, τα αποτελέσματα των εξετάσεων μπορεί να είναι ψευδή. Αυτό το φαινόμενο είναι επίσης δυνατό στην περίπτωση του ογκολογικά νοσήματα, με σηψαιμία.

Η συγκόλληση είναι πολύ σημαντική στην ιατρική. Επιτρέπει όχι μόνο τον προσδιορισμό της ομάδας αίματος, αλλά και τον εντοπισμό του αιτιολογικού παράγοντα των ασθενειών, καθώς και της παρουσίας λοιμώξεων. Το κύριο πράγμα είναι να ακολουθείτε τις συστάσεις του γιατρού κατά την προετοιμασία αυτής της διαδικασίας. Όσο για το ιατρικό προσωπικό, καθήκον του είναι να δημιουργούν ευνοϊκές συνθήκες και να συμμορφώνονται με όλους τους κανόνες. Μόνο έτσι μπορεί κανείς να πετύχει ακριβή αποτελέσματακατά την εκτέλεση συγκόλλησης αίματος.

Αντιγόνα με τη μορφή σωματιδίων (μικροβιακά κύτταρα, ερυθροκύτταρα και άλλα σωματιδιακά αντιγόνα) συμμετέχουν σε αυτές τις αντιδράσεις, τα οποία κολλάνε μεταξύ τους με αντισώματα και καθιζάνουν.

Για τη ρύθμιση μιας αντίδρασης συγκόλλησης(RA) απαιτεί τρία συστατικά: 1) αντιγόνο (συγκολλητογόνο).

2) αντίσωμα (συγκολλητίνη)

3) ηλεκτρολύτης (ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου).

Κατά προσέγγιση αντίδραση συγκόλλησης (RA)

Η κατά προσέγγιση, ή ελασματοειδής, RA τοποθετείται σε μια γυάλινη πλάκα σε θερμοκρασία δωματίου. Για να γίνει αυτό, μια σταγόνα ορού σε αραίωση 1:10 - 1:20 και μια σταγόνα ελέγχου ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου εφαρμόζονται ξεχωριστά στο ποτήρι με μια πιπέτα Pasteur. Αποικίες ή καθημερινή καλλιέργεια βακτηρίων (μια σταγόνα diagnosticum) εισάγονται και στους δύο βακτηριολογικούς βρόχους και αναμειγνύονται επιμελώς. Οι αντιδράσεις λαμβάνονται υπόψη σε λίγα λεπτά οπτικά, μερικές φορές με μεγεθυντικό φακό (x5). Με θετική ΡΑ σε σταγόνα με ορό, σημειώνεται η εμφάνιση μεγάλων και μικρών νιφάδων, με αρνητική ΡΑ, ο ορός παραμένει ομοιόμορφα θολό.

Ρύζι. 2. Κατά προσέγγιση αντίδραση συγκόλλησης.

Εκτεταμένη αντίδραση συγκόλλησηςπροκειμένου να προσδιοριστεί ο τίτλος των ειδικών αντισωμάτων σε έναν ασθενή.

Διευρυμένη ΡΑ για οροδιάγνωση τοποθετείται στον ορό των ασθενών. Αραιώνεται σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου από 1:50 - 1:100 έως 1:800 ή 1:1600. Επειδή οι χαμηλότεροι τίτλοι ορού μπορεί να περιέχουν φυσιολογικές συγκολλητίνες που υπάρχουν σε υγιείς ανθρώπουςή ασθενείς με άλλη διάγνωση (διαγνωστικός τίτλος). Ως αντιγόνο σε αυτή την αντίδραση, χρησιμοποιούνται διαγνωστικά - γνωστά εναιωρήματα, κατά κανόνα, νεκρών βακτηρίων.

1 ml ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου χύνεται προκαταρκτικά σε σωλήνες συγκόλλησης. Στο πρώτο προστίθεται 1 ml ορού αραιωμένου 1:100 και μετά την ανάμιξή του μεταφέρεται 1 ml στον δεύτερο, από τον δεύτερο στον τρίτο κ.λπ. Στις προκύπτουσες διπλές αραιώσεις ορών (από 1:100 έως 1:1600 ή περισσότερο), προστίθενται 1-2 σταγόνες από ένα εναιώρημα βακτηρίων που περιέχει 3 δισεκατομμύρια μικροβιακά σώματα ανά 1 ml. Οι σωλήνες ανακινούνται και τοποθετούνται σε θερμοστάτη στους 37°C για 2 ώρες και στη συνέχεια διατηρούνται σε θερμοκρασία δωματίου για μία ημέρα.

Η καταμέτρηση της αντίδρασης της διογκωμένης συγκόλλησης πραγματοποιείται αξιολογώντας κάθε δοκιμαστικό σωλήνα διαδοχικά, ξεκινώντας από τους ελέγχους, με ήπια ανακίνηση. Δεν πρέπει να υπάρχει συγκόλληση στους σωλήνες ελέγχου. Η ένταση της αντίδρασης συγκόλλησης σημειώνεται με τα ακόλουθα σημάδια: ++++ - πλήρης συγκόλληση (νιφάδες συγκόλλησης σε απόλυτο διαφανές υγρό). +++ - ατελής συγκόλληση (νιφάδες σε ελαφρώς ιριδίζον υγρό). ++ - μερική συγκόλληση (οι νιφάδες είναι σαφώς ορατές, το υγρό είναι ελαφρώς θολό). + - αδύναμη, αμφίβολη συγκόλληση - το υγρό είναι πολύ θολό, οι νιφάδες σε αυτό είναι ελάχιστα διακριτές. - - έλλειψη συγκόλλησης (το υγρό είναι ομοιόμορφα θολό).



Ο τίτλος ορού λαμβάνεται ως η τελευταία του αραίωση, στην οποία η ένταση της συγκόλλησης υπολογίζεται σε τουλάχιστον δύο συν (++)

Ρύζι. 7. Εκτεταμένη αντίδραση συγκόλλησης.

Η αντίδραση της έμμεσης (παθητικής) αιμοσυγκόλλησης (RNHA, RPHA)

Η αντίδραση ορίζεται:

1) για την ανίχνευση πολυσακχαριτών, πρωτεϊνών, εκχυλισμάτων βακτηρίων και άλλων ουσιών υψηλής διασποράς, ρικετσιών και ιών, των οποίων τα σύμπλοκα με συγκολλητίνες δεν μπορούν να παρατηρηθούν στη συμβατική ΡΑ,

2) για την ανίχνευση αντισωμάτων στους ορούς των ασθενών σε αυτές τις ουσίες υψηλής διασποράς και στους μικρότερους μικροοργανισμούς.

Με την έμμεση ή παθητική συγκόλληση νοείται μια αντίδραση στην οποία τα αντισώματα αλληλεπιδρούν με αντιγόνα που είχαν προηγουμένως προσροφηθεί σε αδρανή σωματίδια (λάτεξ, κυτταρίνη, πολυστυρόλιο, οξείδιο του βαρίου κ.λπ. ή ερυθροκύτταρα κριαριού, I (0) -ομάδες αίματος ανθρώπου)

Στην αντίδραση της παθητικής αιμοσυγκόλλησης (RPHA) χρησιμοποιείται ως φορέας ερυθροκύτταρα. Τα φορτωμένα με αντιγόνο ερυθροκύτταρα προσκολλώνται μεταξύ τους παρουσία ειδικών αντισωμάτων σε αυτό το αντιγόνο και κατακρημνίζονται. Τα ευαισθητοποιημένα σε αντιγόνα ερυθροκύτταρα χρησιμοποιούνται στο RPHA ως διαγνωστικό ερυθροκυττάρων για την ανίχνευση αντισωμάτων (οροδιάγνωση). Εάν τα ερυθροκύτταρα είναι φορτωμένα με αντισώματα (ερυθροκυτταρικό αντίσωμα diagnosticum), τότε μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση αντιγόνων.

Ρύζι. 3. Σχήμα RPGA: ερυθροκύτταρα (1), φορτωμένα με αντιγόνο (3), δεσμεύονται από ειδικά αντισώματα (4).

σκαλωσιά. Στα πηγάδια των δισκίων πολυστυρενίου παρασκευάστε μια σειρά από σειριακές αραιώσεις ορού. Στο προτελευταίο φρεάτιο συνεισφέρετε - 0,5 ml γνωστού θετικού ορού και στο τελευταίο 0,5 ml φυσιολογικού ορού (μάρτυρες). Στη συνέχεια, 0,1 ml αραιωμένου ερυθροκυττάρου diagnosticum προστίθεται σε όλα τα φρεάτια, ανακινείται και τοποθετείται σε θερμοστάτη για 2 ώρες.

Λογιστική. Σε μια θετική περίπτωση, τα ερυθροκύτταρα εγκαθίστανται στο κάτω μέρος της οπής με τη μορφή ενός ομοιόμορφου στρώματος κυττάρων με μια διπλωμένη ή οδοντωτή άκρη (μια ανεστραμμένη ομπρέλα), σε μια αρνητική περίπτωση, καθιζάνουν με τη μορφή ενός κουμπιού ή ενός δακτυλίου .

Εικ.4. Λογιστική RNGA (RPGA).

Λογιστική για τα αποτελέσματα του RNHA, που έχει οριστεί για την ανίχνευση τοξίνης αλλαντίασης.

Ο αιτιολογικός παράγοντας της αλλαντίασης - το Clostridium botulinum παράγει τοξίνες επτά ορομέτρων (A, B, C, D, E, F, G), αλλά οι οροί A, B, E είναι πιο συνηθισμένοι από άλλους. Όλες οι τοξίνες διαφέρουν στις αντιγονικές ιδιότητες και μπορούν να διαφοροποιούνται στις αντιδράσεις ανά τυποειδικούς ορούς . Για το σκοπό αυτό, μπορεί να πραγματοποιηθεί παθητική (έμμεση) αντίδραση αιμοσυγκόλλησης με τον ορό του ασθενούς, στον οποίο αναμένεται η παρουσία τοξίνης, και με ερυθροκύτταρα φορτωμένα με αντισώματα αντιτοξικών ορών αντιβοτουλινικής των τύπων A, B, E. ορός χρησιμεύει ως έλεγχος.

Ρύζι. 3. Δήλωση και αποτέλεσμα RNGA.

Λογιστική. Σε μια θετική περίπτωση, τα ερυθροκύτταρα εγκαθίστανται στο κάτω μέρος της οπής με τη μορφή ενός ομοιόμορφου στρώματος κυττάρων με μια διπλωμένη ή οδοντωτή άκρη (μια ανεστραμμένη ομπρέλα), σε μια αρνητική περίπτωση, καθιζάνουν με τη μορφή ενός κουμπιού ή ενός δακτυλίου .

Συμπέρασμα: Η βοτουλινική τοξίνη τύπου Ε βρέθηκε στον ορό του ασθενούς.

Αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης (RTGA).

Ρύζι. 8. Αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης (RTGA) (σχήμα).

Η αρχή της αντίδρασης βασίζεται στην ικανότητα της ΑΤ να δεσμεύει διάφορους ιούς και να τους εξουδετερώνει, καθιστώντας αδύνατη τη συγκόλληση των ερυθροκυττάρων. Οπτικά, η επίδραση αυτή εκδηλώνεται στην «αναστολή» της αιμοσυγκόλλησης. Το RTHA χρησιμοποιείται στη διάγνωση ιογενών λοιμώξεων για τον εντοπισμό ειδικών αντιαιμοσυγκολλητινών και τον εντοπισμό διαφόρων ιών από τις αιμοσυγκολλητίνες τους, οι οποίοι εμφανίζουν τις ιδιότητες του Ag.

Ο προσδιορισμός του ιού πραγματοποιείται στην αντίδραση RTGA με ένα σύνολο τυποειδικών ορών. Τα αποτελέσματα της αντίδρασης λαμβάνονται υπόψη από την απουσία αιμοσυγκόλλησης. Οι υπότυποι ιού τύπου Α με αντιγόνα H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 και άλλα μπορούν να διαφοροποιηθούν σε RTGA με ένα σύνολο ομόλογων τυποειδικών ορών

Ρύζι. 9. Αποτελέσματα RTGA κατά τον τύπο του ιού της γρίπης

Σύμβολα: - αναστολή της αιμοσυγκόλλησης (κουμπί); - αιμοσυγκόλληση (ομπρέλα).

Συμπεράσματα: Το υλικό δοκιμής περιέχει ιό γρίπης τύπου Α με αντιγόνο H3N2.